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    項目介紹

    慢病毒載體是一類重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，由于其結(jié)構(gòu)和功能的特點，慢病毒載體作為一種重要的基因轉(zhuǎn)移工具應(yīng)用于基因治療和細胞分子生物學研究領(lǐng)域。區(qū)別于一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。該載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而達到持久性表達。在感染能力方面可有效地感染神經(jīng)元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內(nèi)皮細胞、干細胞等多種類型細胞，達到良好的基因治療效果。

    特點：1.大大提高對于一些較難轉(zhuǎn)染的細胞，如原代細胞、 干細胞、不分裂的細胞等轉(zhuǎn)導(dǎo)效率

    2.目的基因整合到宿主細胞基因組的概率大大增加

    3.快速獲得高水平的表達

    4.具有最低的細胞毒性，將免疫反應(yīng)降到最低

    5.能夠插入較大的片段（≈ 3kb）

    實驗流程：

    制備編碼慢病毒顆粒的重組病毒質(zhì)粒及其三種輔助包裝原件載體質(zhì)粒，分別進行高純度無內(nèi)毒素抽提，用本公司的轉(zhuǎn)染試劑 RNAi-Mate 共轉(zhuǎn)染293T細胞，轉(zhuǎn)染后6h更換為完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)72h后，收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液，對其濃縮，得到高滴度的慢病毒濃縮液，用于感染目的細胞。感染后的目的細胞可以通過慢病毒載體上的抗性基因和熒光融合蛋白進行篩選。

    常用慢病毒滴度檢測方法比較：




    樣品要求

    樣品運輸和儲存

    對于長距離運輸，應(yīng)先將慢病產(chǎn)品保存在-80℃，再采用全程干冰運輸，以防滴度下降。

    慢病毒載體在-80℃保存6個月，滴度不會明顯下降（保質(zhì)期6個月）。建議保存6~12個月以上的樣品，進行實驗前，重新測一次滴度。應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融（小于3次）。

    使用前請從-80℃冰箱中取出病毒，冰浴溶解。用不完的病毒可以暫時放在4℃冰箱中，若當天不能用完，請立即存放于-80℃冰箱中。

    項目案列
    常見問題

    通常在轉(zhuǎn)移載體中最大能夠插入多大的目的基因序列？

    基于 HIV 基因骨架的原因，通常插入的目的基因序列要小于4 kb，否則會影響病毒滴度甚至基因表達。

    慢病毒感染后多久檢測細胞基因表達？

    慢病毒感染后一般 72~96h 后檢測基因表達，對于生長遲緩代謝慢的細胞，可以適當推遲檢測時間，中途換液保持細胞的良好狀態(tài)。

    Lentivirus 對目的細胞的感染效率很低，如何提高病毒的感染效率？

    一般，我們通過提高 MOI 值來提高病毒的轉(zhuǎn)染效率，必要時以在培養(yǎng)基中加入 Polybrene（4~8 μg/mL）來提高病毒的感染效率。同時，目的細胞良好的生長狀態(tài)是獲得正常感染效率的保證。
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