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Shotgun蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定
蛋白質(zhì)全譜分析也可稱為質(zhì)譜shotgun分析,指的是組分分析,研究對象是完整的組織、體液或其提取物,其目的在于鑒定出盡可能多的肽和蛋白質(zhì)分子。
技術(shù)原理:
蛋白質(zhì)膠條/混合溶液鑒定
利用LC-ESI-MS/MS蛋白鑒定技術(shù)對膠條樣本(即SDS-PAGE樣本)、IP、co-IP、pull-down等純化溶液等中等復(fù)雜樣本進(jìn)行鑒定。
蛋白膠點鑒定
利用MALDI-TOF/TOF蛋白鑒定技術(shù)對考/銀染的2D或DIGE膠點樣本或者較純的蛋白樣本進(jìn)行蛋白鑒定。
鑒定類型 | 樣本類型 | 樣品量 | 保存及運輸方式 |
---|---|---|---|
Shotgun蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定 | 蛋白溶液 | 蛋白質(zhì)總量>10ug,溶液濃度>0.5ug/ul緩沖液不含去污劑NP40、Triton、×100等 | -80℃保存,干冰寄送 |
蛋白質(zhì)膠條/混合溶液鑒定 | SDS-PAGE條帶 | 條帶清晰可見 | |
蛋白混合溶液 | 蛋白質(zhì)總量>10ug,溶液濃度>0.5ug/ul,緩沖液不含去污劑NP40、Triton、×100等 | ||
蛋白質(zhì)膠點鑒定 | 雙向凝膠電泳點 | 膠點清晰可見 | |
SDS-PAGE條帶 | 單一蛋白質(zhì),純度>90%;條帶清晰可見 | ||
蛋白質(zhì)溶液 | 單一蛋白質(zhì),純度>90%;蛋白質(zhì)總量>10ug,溶液濃度>0.5ug/ul |
揭秘蛋白質(zhì)鑒定:蛋白質(zhì)鑒定技巧大公開!
2024-03-27
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