国产成人午夜精品一区二区三区,成 人3d动漫在线观看,老师露出两个奶球让我吃奶头,啦啦啦中文免费视频高清观看

預(yù)存
{{couponData.name}} ¥{{Math.floor(couponData.money)}} {{couponData.discount}}折 ¥{{couponData.random_min_money | int}}~{{couponData.random_max_money|int}}
{{timeH}}:{{timeM}}:{{timeS}}

{{couponData.name}} ¥{{Math.floor(couponData.money)}} {{couponData.discount}}折 ¥{{couponData.random_min_money | int}}~{{couponData.random_max_money|int}} ({{couponData.min_amount==1?'無門檻':'滿'+Math.floor(couponData.min_amount)+'可用'}})

距失效

{{timeH}}

{{timeM}}

{{timeS}}

Document

當(dāng)前位置:生物測試 ?  蛋白實驗 ? 

蛋白印跡實驗(WB)

98%

滿意度

蛋白印跡實驗(WB)

已 預(yù) 約:

3808次

服務(wù)周期:

平均28個工作日完成

關(guān)聯(lián)搜索:

立即下單
咨詢價格

收藏

如有設(shè)備采購需求,請聯(lián)系專屬顧問。
項目介紹

WB(Western Blot,蛋白質(zhì)印跡法)實驗是基于抗原-抗體特異性結(jié)合的特性來檢測特定蛋白質(zhì)的一種蛋白質(zhì)檢測技術(shù)。基本原理是經(jīng)過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體例如硝酸纖維素薄膜(NC膜)或PVDF膜上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。


樣品要求

1、新鮮樣品:1、100mg(至少)新鮮組織,干冰運(yùn)輸;

2、細(xì)胞:細(xì)胞類型樣本細(xì)胞數(shù)為1-2*107以上,收集細(xì)胞后PBS清洗三遍,離心去除上清,干冰運(yùn)輸;

3、血液樣品: 樣品無潛在性攜帶病原體和病毒。如果存在病毒的可能性,請滅活處理;

(1)全血:采集新鮮血液,建議全血樣品用全血樣品RNA提取試劑盒抽提RNA,或者新鮮血液分離白細(xì)胞;處理后的樣本放入干冰或者﹣80℃冰箱保存,干冰運(yùn)輸寄送。

(2)血漿:用EDTA等抗凝劑處理后的樣本,4℃ 4000rpm離心5分鐘,上層為血漿樣本,按每200μl血漿樣本加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol,渦旋搖勻,放入干冰或者-80℃冰箱保存,干冰運(yùn)輸寄送。

(3)血清:用非抗凝管收集血樣,靜置分離上層血清,按每200uL血清加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol,渦旋搖勻,放入干冰或者-80℃冰箱保存,干冰運(yùn)輸寄送。

4、蛋白樣品:未變性的蛋白需要存入-80°C ,干冰運(yùn)輸寄送;Loading Buffer煮沸的蛋白,需要提供蛋白濃度(濃度需在5μg/μl 以上,200μl樣品),冰袋運(yùn)輸寄送。

5、植物組織樣品:選取新鮮組織,200mg以上組織,盡量避免衰老,病變,發(fā)霉的組織;將樣品剪成小塊放入液氮預(yù)冷的螺口離心管中,在液氮中速凍5min,-80度保存,干冰運(yùn)輸寄送。

6、菌體:收集菌體到1.5ml的離心管內(nèi),離心去上清,用1*pbs洗滌三次,液氮速凍5min后,-80度保存。

項目案例

常見問題
1、1、為什么蛋白質(zhì)印跡條帶大小與預(yù)期的不同?

答:蛋白質(zhì)印跡是一種基于蛋白質(zhì)大小來分離蛋白質(zhì)的技術(shù)。一般來講,蛋白質(zhì)越小,在膠上的遷移速度越快。但遷移速度也受其它因素的影響,因此,觀察到的實際條帶大小可能與預(yù)測的不同。

常見的因素包括:

1.翻譯后修飾:例如磷酸化、糖基化等,可增加蛋白質(zhì)大小。

2.翻譯后切割:例如許多蛋白先被合成為前蛋白,然后被切割產(chǎn)生活性形式,例如前半胱天冬酶。

3.剪接變體和異形體:可變剪接和異形體可能從同一基因產(chǎn)生不同大小的蛋白質(zhì)。

4.相對電荷-氨基酸(帶電和不帶電)多聚體組分,例如蛋白質(zhì)的二聚化。這種情況通常在還原條件下需要防止,但強(qiáng)相互作用會導(dǎo)致較大的條帶出現(xiàn)。

2、2、蛋白樣本為什么要進(jìn)行還原和變性?

答:為了使樣本被還原和變性,樣品緩沖液中會含有十二烷基硫酸鈉(SDS)和β-巰基乙醇或二硫蘇糖醇(DTT)。SDS是一種變性劑,用來打破蛋白的高級結(jié)構(gòu),變成初級的氨基酸結(jié)構(gòu),同時以恒定的質(zhì)量比包被蛋白質(zhì),使其帶上負(fù)電荷。這一恒定的負(fù)電荷比是下一步凝膠電泳分離的關(guān)鍵。β-巰基乙醇和DTT都是還原劑,用來斷開蛋白自身的二硫鍵,進(jìn)一步使蛋白質(zhì)變成線性結(jié)構(gòu),此圖中簡單地展示了這一過程。順便提一下,有些抗體只能夠識別目標(biāo)蛋白的天然結(jié)構(gòu),在這種情況下,樣本不需要被還原和變性。所以還原和變性的步驟可以省略。但是,大多數(shù)蛋白質(zhì)印跡分析都需要在還原和變性的體系中進(jìn)行。

3、3、為什么檢測重組蛋白時難以獲得條帶?

答:抗體檢測重組蛋白質(zhì)時,存在難以克服的困難,有必要加以考慮。所以推薦確保樣品中表達(dá)的重組蛋白包含所用抗體的免疫原序列。同時,如果重組蛋白帶有標(biāo)簽,標(biāo)簽可能阻止抗體接近表位。盡可能讓標(biāo)簽位于重組蛋白的C或N末端,以降低這種情況發(fā)生的可能性(而不是位于蛋白質(zhì)的閱讀框中間)。

4、4、牛奶和 BSA 封閉有區(qū)別?

答:抗體可能對封閉劑敏感,一般來講,BSA會產(chǎn)生更清晰的結(jié)果,因為BSA含有較少的蛋白,因而抗體較少與其發(fā)生交叉反應(yīng)。但并非總是如此,有些抗體在牛奶中的效果更好,因為牛奶含有更多種類的封閉蛋白,能封閉更多不同類型的蛋白質(zhì)。

蛋白印跡實驗(WB)

立即下單
护士猛少妇色xxxxx猛叫| 波多野结衣 电影| 午夜精品久久久久久毛片| 人妻熟女一二三区夜夜爱| 亚洲午夜精品久久久久久浪潮| 欧美精品视频| 两个男用舌头到我的蕊花| fc2成年免费共享视频| 国产又色又爽又黄又刺激视频国语| 春药play揉屁股play男男| 国产精品久久久久精品艾秋| 人人爽人人爽人人片AV免费人成| 啊灬啊灬啊灬啊灬快灬高潮了| 天天躁日日躁狠狠躁免费麻豆| 湿润手指揉捏调教h女友| 亚洲精品一区三区三区在线观看| 熟妇的滚烫的肉唇翻进翻出| 曰批全过程免费视频在线观看| 无码精品一区二区三区| 学长惩罚我下面放震蛋上课| 国产免费av| 把女人弄爽特黄a大片视频| 美人双性受h多人运动np| 国产成人一区二区三区影院| 欧美午夜精品久久久久久浪潮| 男男强行扒开小受双腿进入| 一本大道熟女人妻中文字幕在线| 又粗又爽高潮午夜免费视频| の教室の成熟した女教师| 女口述第一次放进去的感受| 狠狠色噜噜狠狠狠狠97首创麻豆| 99精品福利国产在线导航| 边做边爱mp3在线播放免费观看| 被群cao的合不拢腿h纯肉视频| 女人高潮被爽到呻吟在线观看| 欧美大肥婆大肥bbbbb| 爆乳一丝丝不挂裸体大胸美女写真| 全职法师第6季全集免费观看| 精品av无码国产一区二区| 欧美激情综合五月色丁香| 熟妇人妻av无码一区二区三区|