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細胞增殖及毒性檢測的常見實驗方法

來源：時間：2024-09-30 10:05:50 瀏覽：616次

細胞增殖及毒性檢測的常見實驗方法

細胞增殖及毒性檢測是生物醫(yī)學研究中的重要內容，對于藥物篩選、毒理學研究等領域具有重要意義。

以下介紹幾種常見的細胞增殖及毒性檢測實驗方法：

一、MTT實驗（噻唑藍比色法）

1. 原理：MTT實驗是一種檢測細胞增殖的方法；MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽）可被活細胞內的線粒體酶還原成紫色結晶物甲簪，而死細胞無此功能；通過溶解結晶物，可測定吸光度，從而反映細胞增殖情況。

2. 方法：（1）將細胞接種于96孔板，加入不同濃度的待測物質；（2）培養(yǎng)一定時間后，加入MTT溶液；（3）繼續(xù)培養(yǎng)4-6小時，棄去上清，加入DMSO溶解結晶；（4）酶標儀測定570nm處的吸光度值。

二、CCK-8實驗（細胞計數(shù)試劑盒-8）

1. 原理：CCK-8實驗與MTT實驗類似，但其使用的試劑為WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯偶氮)-5-(2,4-二硫唑基)）鹽；WST-8在細胞內的脫氫酶作用下產(chǎn)生黃色的甲簪，吸光度值與活細胞數(shù)量成正比。

2. 方法：（1）將細胞接種于96孔板，加入不同濃度的待測物質；（2）培養(yǎng)一定時間后，加入CCK-8溶液；（3）繼續(xù)培養(yǎng)1-4小時，酶標儀測定450nm處的吸光度值。

三、Brdu實驗（5-溴脫氧尿嘧啶核苷酸實驗）

1. 原理：Brdu是一種類似胸腺嘧啶的核苷酸，可摻入DNA合成過程中；通過檢測Brdu的摻入量，可以反映細胞增殖情況。

2. 方法：（1）將細胞接種于96孔板，加入不同濃度的待測物質；（2）培養(yǎng)一定時間后，加入Brdu溶液；（3）繼續(xù)培養(yǎng)一定時間，固定細胞，加入抗Brdu抗體；（4）酶標儀測定450nm處的吸光度值。

四、克隆形成實驗

1. 原理：克隆形成實驗是通過統(tǒng)計克隆形成率來評價細胞增殖能力；克隆形成率越高，細胞增殖能力越強。

2. 方法：（1）將細胞接種于培養(yǎng)皿，加入不同濃度的待測物質；（2）培養(yǎng)一定時間后，棄去上清，固定細胞，染色；（3）顯微鏡下計數(shù)克隆數(shù)，計算克隆形成率。

五、EdU實驗（5-乙炔基-2'-脫氧尿嘧啶核苷酸實驗）

1. 原理：EdU是一種新型的DNA標記物，可替代Brdu進行細胞增殖檢測；EdU與DNA的親和力更高，檢測信號更穩(wěn)定。

2. 方法：（1）將細胞接種于96孔板，加入不同濃度的待測物質；（2）培養(yǎng)一定時間后，加入EdU溶液；（3）繼續(xù)培養(yǎng)一定時間，固定細胞，加入熒光標記的抗EdU抗體；（4）熒光顯微鏡下觀察細胞熒光強度。

六、LDH實驗（乳酸脫氫酶釋放實驗）

1. 原理：LDH是一種胞內酶，當細胞膜受損時，LDH會釋放到細胞外；通過檢測培養(yǎng)上清中的LDH活性，可以評估細胞毒性。

2. 方法：（1）將細胞接種于96孔板，加入不同濃度的待測物質；（2）培養(yǎng)一定時間后，收集上清；（3）加入LDH底物，酶標儀測定490nm處的吸光度值。

七、中性紅攝取實驗

1. 原理：中性紅是一種細胞活性染料，活細胞可將其攝入細胞內；通過測定細胞內中性紅的含量，可以評估細胞毒性。

2. 方法：（1）將細胞接種于96孔板，加入不同濃度的待測物質；（2）培養(yǎng)一定時間后，加入中性紅溶液；（3）繼續(xù)培養(yǎng)一定時間，棄去上清，溶解細胞內的中性紅；（4）酶標儀測定540nm處的吸光度值。

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