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    細胞增殖及毒性檢測的常見實驗方法
    來源: 時間:2024-09-30 10:05:50 瀏覽:616次

    細胞增殖及毒性檢測的常見實驗方法

     

    細胞增殖及毒性檢測是生物醫(yī)學研究中的重要內容,對于藥物篩選、毒理學研究等領域具有重要意義。

    以下介紹幾種常見的細胞增殖及毒性檢測實驗方法:

    一、MTT實驗(噻唑藍比色法)

    1. 原理:MTT實驗是一種檢測細胞增殖的方法;MTT3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽)可被活細胞內的線粒體酶還原成紫色結晶物甲簪,而死細胞無此功能;通過溶解結晶物,可測定吸光度,從而反映細胞增殖情況。

    2. 方法:(1)將細胞接種于96孔板,加入不同濃度的待測物質;(2)培養(yǎng)一定時間后,加入MTT溶液;(3)繼續(xù)培養(yǎng)4-6小時,棄去上清,加入DMSO溶解結晶;(4)酶標儀測定570nm處的吸光度值。

    二、CCK-8實驗(細胞計數(shù)試劑盒-8

    1. 原理:CCK-8實驗與MTT實驗類似,但其使用的試劑為WST-82-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯偶氮)-5-(2,4-二硫唑基))鹽WST-8在細胞內的脫氫酶作用下產(chǎn)生黃色的甲簪,吸光度值與活細胞數(shù)量成正比。

    2. 方法:(1)將細胞接種于96孔板,加入不同濃度的待測物質;(2)培養(yǎng)一定時間后,加入CCK-8溶液;(3)繼續(xù)培養(yǎng)1-4小時,酶標儀測定450nm處的吸光度值。

    三、Brdu實驗(5-溴脫氧尿嘧啶核苷酸實驗)

    1. 原理:Brdu是一種類似胸腺嘧啶的核苷酸,可摻入DNA合成過程中通過檢測Brdu的摻入量,可以反映細胞增殖情況。

    2. 方法:(1)將細胞接種于96孔板,加入不同濃度的待測物質;(2)培養(yǎng)一定時間后,加入Brdu溶液;(3)繼續(xù)培養(yǎng)一定時間,固定細胞,加入抗Brdu抗體;(4)酶標儀測定450nm處的吸光度值。

    四、克隆形成實驗

    1. 原理:克隆形成實驗是通過統(tǒng)計克隆形成率來評價細胞增殖能力;克隆形成率越高,細胞增殖能力越強。

    2. 方法:(1)將細胞接種于培養(yǎng)皿,加入不同濃度的待測物質;(2)培養(yǎng)一定時間后,棄去上清,固定細胞,染色;(3)顯微鏡下計數(shù)克隆數(shù),計算克隆形成率。

    五、EdU實驗(5-乙炔基-2'-脫氧尿嘧啶核苷酸實驗)

    1. 原理:EdU是一種新型的DNA標記物,可替代Brdu進行細胞增殖檢測EdUDNA的親和力更高,檢測信號更穩(wěn)定。

    2. 方法:(1)將細胞接種于96孔板,加入不同濃度的待測物質;(2)培養(yǎng)一定時間后,加入EdU溶液;(3)繼續(xù)培養(yǎng)一定時間,固定細胞,加入熒光標記的抗EdU抗體;(4)熒光顯微鏡下觀察細胞熒光強度。

    六、LDH實驗(乳酸脫氫酶釋放實驗)

    1. 原理:LDH是一種胞內酶,當細胞膜受損時,LDH會釋放到細胞外;通過檢測培養(yǎng)上清中的LDH活性,可以評估細胞毒性。

    2. 方法:(1)將細胞接種于96孔板,加入不同濃度的待測物質;(2)培養(yǎng)一定時間后,收集上清;(3)加入LDH底物,酶標儀測定490nm處的吸光度值。

    七、中性紅攝取實驗

    1. 原理:中性紅是一種細胞活性染料,活細胞可將其攝入細胞內;通過測定細胞內中性紅的含量,可以評估細胞毒性。

    2. 方法:(1)將細胞接種于96孔板,加入不同濃度的待測物質;(2)培養(yǎng)一定時間后,加入中性紅溶液;(3)繼續(xù)培養(yǎng)一定時間,棄去上清,溶解細胞內的中性紅;(4)酶標儀測定540nm處的吸光度值。

     

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    12條評論
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    全部 3小時前 四川
    文字是人類用符號記錄表達信息以傳之久遠的方式和工具?,F(xiàn)代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產(chǎn)生書面文字,很多小語種,有語言但沒有文字。文字的不同體現(xiàn)了國家和民族的書面表達的方式和思維不同。文字使人類進入有歷史記錄的文明社會。
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