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    一文詳細(xì)介紹he染色的基本原理、實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)
    來源: 時間:2023-11-23 16:18:24 瀏覽:8752次

    一文詳細(xì)介紹he染色的基本原理、實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)

     

    HE染色法,又稱蘇木素-伊紅染色法,是一種廣泛應(yīng)用于組織學(xué)、胚胎學(xué)和病理學(xué)教學(xué)與科研中的染色方法。




    一、基本原理

    HE染色法利用兩種染料,即堿性染料蘇木素和酸性染料伊紅,分別與細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)發(fā)生作用,使細(xì)胞的微細(xì)結(jié)構(gòu)通過顏色改變其折光率,從而在光鏡下清晰地呈現(xiàn)出細(xì)胞圖像。染色過程中既有化學(xué)反應(yīng),又有物理作用參與。

    從化學(xué)反應(yīng)來看,組織細(xì)胞內(nèi)含有酸性物質(zhì)和堿性物質(zhì)。細(xì)胞的酸性物質(zhì)與堿性染料的陽離子結(jié)合,細(xì)胞核的堿性物質(zhì)與酸性染料的陰離子結(jié)合。因此,酸性細(xì)胞核被堿性的蘇木素染成藍(lán)色,而堿性的胞漿被酸性染料伊紅染成紅色。從物理現(xiàn)象來看,主要有吸附和吸收之說。HE染色提供良好的核漿對比染色,是細(xì)胞化學(xué)染色中最常用的一種方法。

     

    二、實(shí)驗(yàn)步驟

    1. 樣品制備:對于貼壁生長細(xì)胞,胰酶消化,調(diào)整細(xì)胞濃度約1105/ml,滴加于蓋玻片上(置于6孔板中),培養(yǎng)相應(yīng)時間后,取出細(xì)胞爬片,用PBS洗滌3次。

    2. 樣品固定:95%乙醇固定20minPBS洗滌2次,每次1min。

    3. 染核:蘇木素染液染色2-3min,自來水洗滌。

    4. 分色:鏡下觀察,若細(xì)胞核染色過深,用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒,自來水洗滌。

    5. 染胞質(zhì):浸入伊紅染液染色1min,自來水洗滌。

    6. 吹干或自然晾干細(xì)胞爬片后,中性樹膠封片。

    若細(xì)胞用4%多聚甲醛固定,則染色時間相應(yīng)延長,蘇木素染色12-15min,伊紅5min即可。

     

    三、注意事項(xiàng)

    1. 染色時調(diào)節(jié)pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長,組織酸化而影響細(xì)胞核著色。因此,要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min,使細(xì)胞核著色較深。染伊紅時胞漿著色不佳,可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。

    2. 切片染蘇木精后,分色這一步是關(guān)鍵,應(yīng)在顯微鏡下控制進(jìn)行。一般以細(xì)胞核染色清楚(晰)而細(xì)胞質(zhì)基本無色為佳。如果過分延長分色時間將導(dǎo)致染色太淺,應(yīng)重新染色后再行分色。

    3. 切片經(jīng)酒精脫水后,入二甲苯時可出現(xiàn)白色不透明狀態(tài),此為脫水不徹底,應(yīng)將切片退回?zé)o水酒精,重新脫水。

    4. 脫蠟。切片脫蠟后才能染色,且脫蠟應(yīng)徹底。脫蠟好壞主要取決于二甲苯的溫度和時間。如果二甲苯是用過一段時間,切片又比較厚,室溫低應(yīng)增加脫蠟時間。

    5. 在染色過程中,各種試劑的使用順序、濃度和時間應(yīng)嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)步驟操作,以免影響染色效果。

    6. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,要清潔實(shí)驗(yàn)臺和儀器設(shè)備,妥善保存試劑,以免影響下次實(shí)驗(yàn)。

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    12條評論
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    全部 3小時前 四川
    文字是人類用符號記錄表達(dá)信息以傳之久遠(yuǎn)的方式和工具?,F(xiàn)代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產(chǎn)生書面文字,很多小語種,有語言但沒有文字。文字的不同體現(xiàn)了國家和民族的書面表達(dá)的方式和思維不同。文字使人類進(jìn)入有歷史記錄的文明社會。
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