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為什么蛋白質(zhì)印跡條帶大小與預(yù)期的不同？

來源：測(cè)試GO 時(shí)間：2022-09-08 15:04:17 瀏覽：1105次

蛋白質(zhì)免疫印跡法，即Western Blot法,是在分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)等領(lǐng)域使用的一個(gè)重要實(shí)驗(yàn)技術(shù)。其基本原理是利用特異性抗體對(duì)經(jīng)凝膠電泳處理過的細(xì)胞或生物組織樣本進(jìn)行染色，并通過分析所染色的細(xì)胞部位和染色深度，獲取有關(guān)特異蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)狀況變化的信號(hào)，目前已應(yīng)用于基因在蛋白質(zhì)水平上的表達(dá)研究、抗體活性測(cè)定,以及疾病早期治療等許多方面。

實(shí)驗(yàn)過程中的儀器展示圖

蛋白質(zhì)印跡法是一項(xiàng)根據(jù)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)而分離蛋白質(zhì)的方法。一般蛋白質(zhì)越小，在膠上的移動(dòng)速率就越高。但由于移動(dòng)速率也會(huì)受到其它因子的影響，所以，觀測(cè)得到的實(shí)際條帶大小會(huì)和人們預(yù)期的結(jié)果有所不同。

常見的因素包括：

1.翻譯后修飾：例如磷酸化、糖基化等，可增加蛋白質(zhì)大小。

2.翻譯后切割：例如大多蛋白先被合成為前蛋白，然后被切割產(chǎn)生活性形式，例如前半胱天冬酶。

3.剪接變體和異形體：可變剪接和異形體可能從同一基因產(chǎn)生不同大小的蛋白質(zhì)。

4.相對(duì)電荷-氨基酸（帶電和不帶電）多聚體組分，例如蛋白質(zhì)的二聚化。這種情況通常在還原條件下需要防止，但強(qiáng)相互作用會(huì)導(dǎo)致較大的條帶出現(xiàn)。

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