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細胞克隆形成實驗的目的及實驗過程的注意事項

來源：時間：2022-08-22 15:04:27 瀏覽：2618次

細胞克隆形成實驗是測定單個細胞增殖能力的有效方法，常用于抗腫瘤藥物敏感性測定、基因治療、腫瘤放射生物學(xué)等方面的研究。細胞克隆形成實驗的常用方法有平板克隆形成和軟瓊脂克隆形成兩種。

細胞克隆形成實驗

平板克隆形成實驗與軟瓊脂克隆形成實驗的區(qū)別在于前者操作簡便，可直接將細胞接種于培養(yǎng)器皿培養(yǎng)，細胞間泌的促生長因子可在培養(yǎng)液中擴散，有助于克隆形成率的提高，適用于貼壁生長細胞。而軟瓊脂克隆形成實驗培養(yǎng)基需添加軟瓊脂，以模擬體內(nèi)生長環(huán)境，適用于懸浮細胞。

細胞克隆形成實驗的注意事項：

1. 實驗成功的關(guān)鍵之一是細胞懸液的制備與接種密度，細胞一定要分散均勻，不能有細胞團，接種密度不能過大。

2. 接種完畢后，需將培養(yǎng)基置于37℃ 5% CO2及飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3周，期間需每隔3 d換一次液，換液過程需緩慢加入培養(yǎng)基，避免將細胞吹起。

3. 當(dāng)肉眼可觀察到培養(yǎng)皿中出現(xiàn)克隆后終止培養(yǎng)，棄上清，用PBS小心沖洗2~3次，而后固定15 min、結(jié)晶紫染色20 min，洗去染色液后觀察計數(shù)，克隆形成率=（克隆數(shù)/接種細胞數(shù)）×100%。

4. 在軟瓊脂克隆形成實驗中，需配置下層軟瓊脂和上層軟瓊脂，前者是為防止細胞貼附生長，后者是作為營養(yǎng)補充劑以及為防止下層瓊脂膠干燥。

5. 軟瓊脂與細胞液混合時溫度不宜超過40℃，否則將會燙傷/死細胞。

6. 瓊脂經(jīng)滅菌后應(yīng)分裝備用，反復(fù)加熱易導(dǎo)致瓊脂降解而產(chǎn)生毒性，且其硬度也會有所下降。

7. 不同細胞的生長能力有所差異，若細胞克隆率過低，可在培養(yǎng)基中添加胰島素等促克隆形成物質(zhì)。

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